冻融交替

dna反复冻融洗脱液体积过少(30μl)
更新时间:2020-10-03 13:21 浏览:59 关闭窗口 打印此页

  5) DNA 洗脱不适当:洗脱缓冲液pH 过低会阻碍DNA从硅胶模上洗脱下来,应确保洗脱液pH值在7.0-8.5之间。洗脱液体积过少(30μl),不易浸透硅胶模,使DNA不能洗脱下来,因此洗脱液体积应大于30μl,超过200μl,所得的DNA 浓度降低。洗脱时可以将洗脱液于65-70℃水浴预热,加入洗脱液后在室温静置2-5分钟,可提高洗脱效率,加大DNA 产量。

  或幼嫩的植物组织等,不能立即处理的样品应放入液氮或-70℃低温保存,以免DNA 降解。

  3) 样品过多导致细胞裂解不充分:加样过多导致细胞裂解不充分,细胞裂解不充分。

  2) 样品破壁或者裂解不完全,DNA 未充分释放:动植物样品应在液氮中充分研磨,G+细菌、酵母等破壁较困难的样品应用溶菌酶、Lyticase酶或机械方法协助破壁。

  4) DNA 吸附不均匀:如在上吸附柱前没有加无水乙醇,或使用低浓度乙醇代替无水乙醇,会导致DNA 不能充分沉淀,与硅胶模吸附不彻底,因此应在样品裂解后加适量的无水乙醇,再上吸附柱使DNA 与硅胶模充分吸附。

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